Esej ABTS
Je to analytická metóda, ktorá využíva spektrofotometrické meranie na stanovenie antioxidačnej kapacity vzorky. Použitím UV-Vis spektrofotometra sa meria absorbancia roztoku obsahujúceho radikál ABTS • +, generovaná oxidáciou ABST (2, 2'-azinobis (3-etylbenzotiazolin-6-sulfonátu), bezfarebnej látky vo forme radikály sú zafarbené absorbovaním pri vlnových dĺžkach vo viditeľnom rozsahu Pridanie antioxidačných molekúl ABTS • + k roztoku ABTS + +, ktoré môže pôsobiť prenosom vodíka a elektrónu, určuje redukciu radikálu na bezfarebnú formu, s následným zafarbením reakčnej zmesi. Toto bielenie, úmerné množstvu prítomného antioxidantu, sa môže merať ako zníženie absorbancie v určitom čase pri špecifickej vlnovej dĺžke (734 nm). hodnoty absorbancie merané pre známe množstvá antioxidačnej molekuly zvolenej ako referenčný štandard, ktorým je zvyčajne kyselina askorbová alebo Trolox (v tomto prípade hovoríme o antioxidačnej aktivite TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Meranie antioxidačnej sily založené na použití ABTS má tú výhodu, že je jednoduché a rýchle. Okrem toho umožňuje meranie antioxidačných látok hydrofilných aj lipofilných v širokom rozsahu pH. Treba však mať na pamäti, že použitý radikál (ABTS • +) nie je fyziologický a nie je prítomný v biologických systémoch a že problémy s opakovateľnosťou merania v dôsledku reakčnej kinetiky rôznych zahrnutých antioxidantov sú často zvýraznené.
FRAP (Ferric Reduction Antioxidant Power)
Test FRAP meria redukčnú schopnosť antioxidantov voči iónom železa. Je to metóda založená na prenose elektrónov, v ktorej ióny železa prechádzajú z Fe3 + na Fe2 +. Za určitých podmienok pH (3, 6) a v prítomnosti TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazínu) tvoria tieto ióny komplexy s rôznymi vlastnosťami, najmä redukovaným derivátom (Fe2 + -TTPZ) má modrú farbu, ktorá má maximálnu absorpciu pri 593 nm, ktorá môže byť meraná spektrofotometricky. Redukčná kapacita antioxidačnej látky môže byť preto meraná ako zmena absorbancie roztoku obsahujúceho oxidačné činidlo na vlnovej dĺžke stanovenej v porovnaní s odchýlkou vzhladom na štandard (napr. Kyselina askorbová).
FRAP test bol navrhnutý na meranie redukčnej sily plazmy, ale potom bol prispôsobený na testovanie antioxidačnej kapacity čistých zlúčenín a komplexných matríc. Pretože táto metóda umožňuje vyhodnotiť iba redukčnú kapacitu pomocou prenosu elektrónov, úplne ignorujúc pôsobenie antioxidantov, ktoré pôsobia prenosom vodíka, neumožňuje merať príspevok molekúl, ako sú tioly a proteíny, ktoré hrajú antioxidačnú úlohu v biologických tekutinách (napr. krv). Výhodou pri použití tohto spôsobu je, že je to jedna z najjednoduchších, najrýchlejších a najmenej nákladných metód na stanovenie antioxidačnej kapacity in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenyl-1-pikrilhydrazyl (DPPH) je veľmi stabilný a komerčne dostupný dusíkatý radikál, ktorý sa vyznačuje intenzívnou purpurovo červenou farbou, ktorá je matná, keď je redukovaná v prítomnosti molekuly s antioxidačnou kapacitou. Spektrofotometrickým meraním zmeny absorbancie roztoku DPPH po reakcii s antioxidačnou zlúčeninou pri 517 nm je možné kvantifikovať redukčnú kapacitu testovanej látky bez ohľadu na to, či pôsobí s prenosom vodíka alebo prenosom elektrónov. Výsledok je všeobecne vyjadrený ako IC50, tj množstvo antioxidantu schopné znížiť počiatočnú koncentráciu DPPH o 50%.
Ide o rýchly, jednoduchý a lacný spôsob. Hranice tejto analytickej techniky sú dané možnosťou, že výsledky analýzy sú skreslené v prípade, keď molekuly, ktoré sú predmetom vyšetrenia, absorbujú v rovnakom rozsahu vlnových dĺžok radikálu DPPH alebo v prítomnosti veľkých molekúl, ktoré sú stékané stericky, ktoré nie sú reagujú s reaktívnou časťou radikálu. To spôsobuje, že DPPH reaguje s antioxidantmi až 1000-krát pomalšie ako peroxylové radikály.
Test PCL (fotochemiluminiscencia)
Test PCL je založený na reakcii špecifického radikálového druhu, superoxidového aniónu (O2 • -), vytvoreného fotochemicky UV žiarením, so zlúčeninou schopnou emitovať chemiluminiscenciu. Použitým markerom je luminol, molekula, ktorá pri oxidácii voľnými radikálmi emituje svetlo, ktoré je možné merať pomocou špeciálneho nástroja (Photochem®). Prítomnosť antioxidačných látok v dávkovej zmesi deaktivuje radikálový druh inhibujúci emisiu chemiluminiscencie. Analýza PCL je veľmi rýchla a citlivá. Okrem toho, s použitím dvoch rôznych analytických protokolov, nazývaných ACW (Antioxidant Capacity rozpustné vo vode) a ACL (Antioxidant Capacity Lipid rozpustný), je možné merať príspevok k celkovej antioxidačnej kapacite vo vode rozpustnej zložky (flavonoidy, vitamín E) pre tú istú zlúčeninu. C, aminokyseliny, atď.) Ako je lipozol rozpustný (tokoferoly, tokotrienoly, karotenoidy, atď.). Antioxidačná kapacita testovaného produktu sa získa porovnaním hodnôt zaznamenaných s meraniami týkajúcimi sa štandardných referenčných molekúl, kyseliny askorbovej pre protokol ACL a Trolox pre protokol ACW.
