všeobecnosť
Imunofixácia je laboratórny test, ktorý umožňuje identifikáciu a typizáciu gama globulínov prítomných v biologickej vzorke.
Podrobne analýza umožňuje študovať - v krvi pacienta alebo v moči - triedy imunoglobulínov (IgA, IgG, IgM, IgE alebo IgD) a typ ľahkého reťazca kappa alebo lambda podľa ich špecifickej elektroforetickej mobility, Následne, na identifikáciu gama globulínu, imunofixácia zahŕňa inokuláciu špecifických antigénov pre fragment alebo zodpovedajúcu protilátku ( anti-imunoglobulínové antiséra ): prítomnosť podozrenia na zmenu je potvrdená tvorbou zrazeniny, ktorá je viditeľná voľným okom alebo mikroskopom.
Tieto informácie majú veľký význam najmä pri stanovení diagnózy patológií plazmatických buniek (gamatopatie alebo dyskrázie plazmatických buniek). Imunofixácia je veľmi užitočná na hodnotenie a monitorovanie mnohopočetného myelómu, Waldenströmovej makroglobulinémie a primárnej amyloidózy (tiež nazývanej amyloidóza ľahkého reťazca).
čo
Imunofixácia (alebo imunoelektroforéza, tiež skrátená v skratke IFE ) je technika schopná určiť, či a ktorá trieda imunoglobulínov (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) alebo typu ľahkého reťazca kappa alebo lambda je prítomná v nadbytok alebo porucha krvného séra pacienta a moču.
Ľahké reťazce kappa a lambda charakterizujú monoklonálnu zložku, tj protilátky s rovnakou identickou chemickou štruktúrou.
Imunofixácia séra a moču: kedy je to indikované?
Plasmacelulárne dysplázie alebo gamapatie sú heterogénnou skupinou porúch neznámej etiológie charakterizovaných:
- Neproporcionálna proliferácia klonu B buniek ;
- Prítomnosť typu imunoglobulínu (alebo jeho polypeptidovej podjednotky) v sére a / alebo moči, štruktúrne a elektroforeticky homogénnej ( monoklonálnej ).
Normálne sa diagnostikujú dyskrázie plazmatických buniek s použitím elektroforézy proteínov v sére a moči, po ktorých nasleduje sérová imunofixácia (IFE).
Súčasne môže byť predpísaný krvný test na meranie celkovej koncentrácie imunoglobulínov (IgG + IgM + IgA).
Viac informácií: Imunoglobulíny - čo sú, ako sa merajú a referenčné hodnoty »Imunofixácia: základný princíp
Imunofixácia je vyšetrenie, ktoré zahŕňa dve fázy (najprv elektroforézu na agarózovom géli, potom imunoprecipitáciu so špecifickými antisérami ).
Prvý krok imunofixácie je rovnaký ako v prípade ELEKTROFORÉZY proteínov (alebo protidogrammy), preto je potrebné pamätať na niektoré koncepcie:
- Elektroforéza je laboratórna analýza, ktorá umožňuje stanoviť množstvo proteínov prítomných v krvnom sére alebo v iných biologických vzorkách a pre každú frakciu sa zistí, či existujú nejaké anomálie z hľadiska kvality. Táto skúška umožňuje separáciu proteínov do piatich skupín: albumín, alfa 1 globulín, alfa 2 globulín, beta globulín a gama globulín ; tieto sú podrobnejšie skúmané s imunofixáciou.
- Elektroforéza je separačná metóda založená na odlišnej rýchlosti migrácie elektricky nabitých častíc, cez roztok a inertné nosné médium, pod vplyvom elektrického poľa, generovaného jednosmerným prúdom. V praxi skúška využíva elektrický náboj a molekulovú hmotnosť proteínov prítomných vo vzorke pacienta. Pod impulzom elektrického poľa tieto makromolekuly migrujú a "skupujú" podľa typu, pričom reagujú na stres charakteristickým spôsobom. Výsledok ( elektroforetické sledovanie ) pozostáva z rôznych vrcholov a kriviek, ktorým zodpovedajú proteínové frakcie. Normálne je prvý vrchol, vyšší a užší, albumín ; sledujeme vrcholy globulínu, oveľa nižšie ako albumín. Zvýšenie alebo zníženie amplitúdy a intenzity píkov, ktoré sa tvoria v dráhe, indikujú väčšiu alebo menšiu prítomnosť proteínov v každej kategórii; čím viac proteínov je prítomných v páse, tým vyšší je príslušný pík. V prípade gama globulínov, ak sa chce poznať množstvo každej z rôznych tried (IgA, IgM, IgG atď.), Bude potrebné použiť jednorazovú dávku. Všeobecne platí, že čím viac gama globulínov je prítomných v páse, tým vyšší je príslušný vrchol; výška zodpovedá celkovému množstvu bielkovín patriacich do určitej kategórie.
IMMUNOFISSATION poskytuje:
1) Elektroforéza na agarózovom géli : vzorka pacienta (sérum alebo moč) sa uloží na elektroforetický pásik, tj na podporu migrácie (zvyčajne agarózový gél). Aplikáciou elektrického poľa generovaného jednosmerným prúdom sa získa separácia v rôznych pásmach. V praxi každý typ gama globulínu prítomného v zmesi (tj vo vzorke pacienta) migruje na základe molekulovej hmotnosti a elektrického náboja. Rozdielna elektroforetická pohyblivosť gama globulínov umožňuje ich identifikáciu (každý z nich sa zhoduje so špecifickým pásmom v elektroforetickej dráhe) a pozoruje akékoľvek anomálie.
2) Imunoprecipitácia so špecifickým antisérom (fixácia) : ku každému elektroforetickému pásu (anti-IgG, anti-lgA, anti-IgM, anti-light kappa alebo anti-reťazec) sa jednotlivo pridajú špecifické antigény pre špecifickú protilátku alebo fragment. lambda ľahký reťazec). Ak je prítomný monoklonálny proteín, interakcia antigénu s odpovedajúcou protilátkou vytvorí úzky pás (to znamená, že výsledok je pozitívny) a vytvorenie zrazeniny, viditeľnej voľným okom alebo mikroskopom. Nakoniec sa vzorka spracuje (tj premyje a vyfarbí), aby sa odstránili proteíny, ktoré sa nevyzrážali, aby sa získal sušený gél a pokračovalo sa v odčítaní výsledkov.
Prečo to beží
Na čo slúži imunofixácia?
Sérová imunofixácia je vyšetrenie indikované na diagnostikovanie alebo monitorovanie ochorení charakterizovaných zmenou gama globulínov, najmä ak sa týka produkcie monoklonálnej zložky ( monoklonálnej gamapatie ).
Ak sa chcete dozvedieť viac: Monoklonálne gamapatie - Čo a čo sú »Imunofixácia je užitočná v prípadoch podozrenia na dyskráziu plazmatických buniek a je základom pre štúdiu MIELOMY (a príbuzných patológií) a MGUS (skratka pre "monoklonálne gamapatie s neistým významom").
Tento test nám tiež umožňuje vyhodnotiť Waldenströmovu makroglobulinémiu a amyloidózu ľahkého reťazca ( AL ).
Imunofixácia: kedy je vyšetrenie predpísané?
Indikácia imunofixácie nasleduje po klinických alebo laboratórnych dôkazoch, ktoré vyvolávajú podozrenie na zmeny monoklonálnych protilátok alebo imunoglobulínov v sére alebo v moči.
Táto skúška napríklad umožňuje prehĺbiť výsledok séroprotektívnej alebo urinárnej elektroforézy: keď sa v elektroforetickom sledovaní pásy, ktoré zodpovedajú gama globulínom, odlišujú od normality, imunofixácia identifikuje, ktorý z týchto proteínov sa zmenil z hľadiska množstva. a kvality.
Súhrnne možno stanoviť imunofixáciu v sére:
- V prípade, že iné laboratórne testy poskytujú abnormálny výsledok, pokiaľ ide o neprítomnosť alebo menšie a väčšie množstvo plazmatických proteínov vzhľadom na normu;
- Ak je podozrenie na prítomnosť chorôb charakterizovaných produkciou monoklonálnej zložky, ako napríklad: \ t
- Mnohopočetný myelóm a jeho varianty;
- Waldenströmova makroglobulinémia;
- amyloidóza;
- Keď sa u pacienta vyvinú príznaky a príznaky, ktoré naznačujú prítomnosť monoklonálnej gamapatie alebo mnohopočetného myelómu, ako napríklad:
- Bolesti kostí;
- anémia;
- Ľahká únava;
- Recidivujúce infekcie;
- Nevysvetliteľné zlomeniny.
V prípade mnohopočetného myelómu majú elektroforéza proteínov a imunofixácia značný význam aj na monitorovanie priebehu ochorenia (sledovanie).
Imunofixácia: na ktorých vzorkách možno vykonať?
Biologické vzorky, ktoré môžu byť podrobené imunofixácii, sú hlavne: \ t
- Sérum (imunofixácia v sére);
- Moč (imunofixácia moču);
- Tekutina * (kvapalinová imunofixácia).
* Poznámka : CSF alebo cerebrospinálna tekutina je tekutina, ktorá preniká a chráni mozog, miechu, lebečné nervy a chrbtice.
Normálne hodnoty
NEGATÍVNY výsledok imunofixácie séra a moču pre monoklonálne alebo polyklonálne gama globulíny sa považuje za NORMÁLNY .
Gama globulíny
Gama globulíny tvoria 9-20% celkových plazmatických proteínov.
- Referenčná hodnota Gama globulín : 0, 9-1, 4 g / dl
Čo sa týka celkovej koncentrácie imunoglobulínov ( IgG + IgM + IgA ), predpokladá sa, že hodnoty medzi 600 a 2300 mg / dl sú normálne.
- Referenčná hodnota Imunogobulíny v sére :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800 až 1800 mg / dl
- IgM : 60 až 280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Poznámka : referenčný interval skúšky sa môže mierne líšiť v závislosti od veku, pohlavia a prístrojového vybavenia použitého v analytickom laboratóriu. Z tohto dôvodu je vhodnejšie konzultovať rozsahy uvedené priamo v prehľade. Treba tiež pripomenúť, že výsledky analýz musí hodnotiť ako celok všeobecný lekár, ktorý pozná zdravotnú anamnézu pacienta.
Vysoké hodnoty - príčiny
Zvýšenie gama globulínov môže byť:
- Polyklonálne, ak je produkcia imunoglobulínov heterogénna, to znamená, že všetky zložky gama globulínov - produkované alebo odvodené z rôznych plazmatických buniek - sú ovplyvnené zvýšením;
- Monoklonálne, keď sú gama globulíny produkované alebo sú odvodené z jediného typu (klonu) plazmatických buniek.
Zvýšenie polyklonálnych gama globulínov môže byť spojené s:
- Chronické zápalové ochorenia;
- Reumatoidná artritída;
- Systémový lupus erythematosus;
- Chronické ochorenia pečene (ako je hepatitída a cirhóza);
- Akútne a chronické infekcie;
- Nedávne imunizácie;
- Niektoré nádorové ochorenia.
Vysoké hodnoty monoklonálnych gama globulínov môžu namiesto toho naznačovať prítomnosť:
- Niektoré neoplazmy a chronické zápaly;
- Mnohopočetný myelóm;
- lymfóm;
- Waldenströmova makroglobulinémia.
Nadbytok gama globulínu sa nazýva hypergamaglobulinémia, zatiaľ čo nedostatok je známy ako hypogamaglobulinémia .
Nízke hodnoty - príčiny
Redukcia gama globulínov môže indikovať prítomnosť rôznych ochorení imunitného systému na genetickom základe, vrátane agamaglobulinémie alebo sekundárnej imunodeficiencie (napr. AIDS, zlyhanie obličiek, akútna sepsa a Cushingov syndróm).
Pokles hodnôt gama globulínu môže závisieť aj od použitia cytostatík, imunosupresív a steroidov.
Ako sa vykonáva
Sérová imunofixácia
Sérová imunofixácia zahŕňa jednoduchý odber krvi zo žily ramena. Sérum sa získa centrifugáciou biologickej vzorky; to umožňuje v skutočnosti oddeliť frakciu obsahujúcu bunky (korpuskulárna časť) od kvapalnej krvi (plazmy). Krvné sérum neobsahuje koagulačné faktory (fibrinogén, faktor VIII, faktor V a protrombín).
Imunofixácia moču
Na vykonanie imunofixácie v moči je potrebné odobrať malé množstvo moču v špeciálnej sterilnej nádobe. Na základe indikácií lekára a laboratória možno vzorku odobrať bez presného načasovania ( náhodne ) alebo do 24 hodín .
Imunofixácia likéru
Analýza vyžaduje odobratie malého množstva cerebrospinálnej tekutiny prostredníctvom vloženia ihly do miechovej dutiny ( lumbálna punkcia ).
príprava
Immunofixácia: ako sa pripravujete na skúšku?
- Pred odberom krvi môžu niektoré laboratóriá vyžadovať, aby ste sledovali rýchlosť aspoň 10-12 hodín. Počas tejto doby je povolené malé množstvo vody.
- Imunofixácia sa môže vykonať na moči odobratej v určitom čase dňa (náhodne) alebo počas 24 hodín, takže je potrebné vopred získať vhodné sterilné nádoby.
- Pokiaľ ide o imunofixáciu roztoku, nie je potrebná žiadna konkrétna príprava.
Čo môže zmeniť výsledok skúšky?
Niektoré lieky môžu ovplyvniť výsledok imunofixácie, preto sa odporúča hlásiť lekárovi akúkoľvek prebiehajúcu liečbu.
Počas šiestich mesiacov pred vyšetrením môže podávanie vakcín (imunizácia) a použitie liekov, ako sú fenytoín, prokaínamid, perorálne kontraceptíva, metadón a terapeutický gama globulín, zvýšiť koncentráciu imunoglobulínov. Ďalšie lieky, ktoré môžu zmeniť výsledok testu, sú kortikosteroidy, neomycín, kyselina acetylsalicylová a chlórpromazín.
Interpretácia výsledkov
Výsledok imunofixácie sa vyhodnotí v kombinácii s výsledkami iných analýz. Výklad nálezu je zodpovednosťou praktického lekára alebo špecialistu, ktorý dokáže identifikovať a porovnať zmeny, ktoré ovplyvňujú špecifický gama globulín (napríklad pás, ktorý sa zhoduje s imunoglobulínmi G) pri určitých ochoreniach. Toto hodnotenie potvrdzuje alebo podporuje diagnostickú hypotézu: vo všeobecnosti môže imunofixácia odhaliť normálny profil gama globulínu alebo identifikovať monoklonálny proteín alebo polyklonálny model .
Akonáhle je ochorenie definované, imunofixácia sa môže vykonať pre:
- Sledujte chorobu v priebehu času, potom sledujte jej priebeh (sledovanie);
- Skontrolujte účinnosť terapeutického protokolu .
Výhody a nevýhody imunofixácie
V porovnaní s proteínovou elektroforézou, imunofixácia:
- Je rýchlejší : výsledky imunizácie sa zvyčajne získajú do troch hodín;
- Je citlivejšia (aj keď mierne): imunofixácia môže odhaliť imunoglobulín vylúčený z proteínovej elektroforézy, najmä pri nízkych koncentráciách (menej ako 1 gram / liter).
Okrem toho imunofixácia:
- Môže byť čiastočne automatizovaný ;
- Je ľahko čitateľný a interpretovateľný .
Imunofixácia je však drahšia ako proteínová elektroforéza a umožňuje len gama-globulínovú analýzu .
Normálny výsledok
Pri imunofixácii normálna cesta zahŕňa:
- Pás, ktorý sa zhoduje s tmavším imunoglobulínom G ( IgG );
- Pás zodpovedajúci najľahšiemu imunoglobulínu A ( IgA );
- Neprítomnosť pásu pre imunoglobulín M ( IgM );
- Pás kappa je hustejší ako pás lambda (ľahký reťazec) s pomerom 2: 1.
Pri normálnom výsledku sú pásy veľké a dochádza k postupnému a rovnomernému znižovaniu hustoty farieb smerom k okrajom pásu imunoelektroforézy.
Polyklonálne gama globulíny
V niektorých prípadoch sú všetky imunofixačné pásy rovnomerne zakryté v rovnakom rozsahu. Tento model predstavuje prítomnosť polyklonálnych imunoglobulínov . Aj v tomto prípade sú pásy široké a prechod na hrany imunoelektroforetického pásu je postupný. Pásmo IgM - zvyčajne chýba - je široké.
Monoklonálne gama globíny
Ak sa v ceste imunofixácie dá identifikovať úzky pás s ostrými hranami, znamená to, že vyhľadávanie monoklonálnych zložiek je pozitívne .
Identifikácia monoklonálneho imunoglobulínu je užitočná pri diagnostike nasledujúcich stavov:
- Monoklonálna gamapatia s neurčeným významom (MGUS);
- Mnohopočetný myelóm;
- Waldenstromova makroglobulinémia;
- Amyloidóza.
Okrem toho sa imunofixácia môže použiť na monitorovanie terapie v dyskrázii plazmatických buniek (tj mnohopočetný myelóm a Waldenstromova makroglobulinémia). Ak hladina monoklonálneho proteínu klesá alebo nie je detegovateľná po chemoterapii, môže to znamenať odpoveď na liečbu . Naopak, monoklonálny proteín pretrvávajúci napriek liečbe je známkou refraktérneho ochorenia .
Upozornenie . Negatívny výsledok imunofixácie nie vždy vylučuje dyskráziu plazmatických buniek. Napríklad nesekrečný mnohopočetný myelóm alebo oligosekretoria môžu dávať negatívne výsledky ako v moči, tak v sére. Preto, ak je diagnostické podozrenie na gamopatiu stále vysoké, je určené stanovenie pomeru ľahkých reťazcov Kappa / Lambda Libere ( pomer K / L ).
Imunofixácia a diagnostika roztrúsenej sklerózy
Imunofixácia mozgovomiechového moku (likér) sa predpisuje, keď lekár má podozrenie na prítomnosť roztrúsenej sklerózy . V tomto prípade je určená dráha charakteristická, pretože poukazuje na prítomnosť tzv. Oligoklonálnych pásiem . Výsledok je uvedený v laboratórnej správe ako pozitívny . Je potrebné vziať do úvahy, že pásy nie sú normálne pozorované v sérovej imunofixácii, pretože korelujú s produkciou intratekálnych gama globulínov .
Treba však poznamenať, že tento nález nemusí nevyhnutne potvrdiť diagnózu, pretože s oligoklonálnymi pásmi v mozgovomiechovom moku sa môžu vyskytnúť iné stavy.
Inými slovami, identifikácia oligoklonálnych pásov s imunofixáciou tekutín je veľmi užitočná na podporu diagnózy roztrúsenej sklerózy, ale musí byť potvrdená inými vyšetreniami . Ďalšími podmienkami, ktoré môžu poskytnúť tento výsledok, sú zápaly centrálneho nervového systému, vrátane: encefalitídy súvisiacej s HIV, neurosyfilisu, neurosarkoidózy, lymskej meningoencefalitídy, malignít CNS, optickej neuromyelitídy a transverzálnej myelitídy.
